本发明公开了一种ChR2-GFP基因工程化神经干细胞株及其构建方法，所述细胞株为能稳定表达光敏感蛋白（ChR2）和绿色荧光蛋白（GFP）的重组C17.2神经干细胞株；通过构建重组慢病毒、转导C17.2神经干细胞株以及筛选获得重组ChR2-GFP基因工程化神经干细胞株；本发明的细胞株可用于移植干细胞分化来源的神经元与宿主神经系统功能整合的在体及离体研究，为干细胞移植后分化来源的神经元与宿主神经系统功能整合的研究提供一个良好的平台；本发明构建重组干细胞方法，尤其是利用滤纸片消化法，提高了GFP阳性细胞的比率，有利于流式FACS分选，大大提高了实验效率。