本发明公开了一种脂肪来源干细胞立体球型培养方法，它涉及细胞培养技术领域。培养方法为:低吸附性培养容器的制作；脂肪来源干细胞提取；采用平面贴壁培养法将脂肪来源干细胞培养至第三代后，以2.5*10⁴/cm²的密度接种在壳聚糖低吸附性培养容器里；选择高糖培养基，每2-3天换液培养；5-8天后可以观察到，在壳聚糖膜表面有立体球型细胞结构形成；将细胞转移到新的贴壁培养瓶中继续培养5-8天；收获细胞和细胞培养液。它的制备方法比较简便，最大限度还原脂肪来源干细胞在人体内的生存状态，释放出更多的生长因子，使细胞聚集成球形生长，还原细胞真实的生理状态，提高细胞功能的表达与发挥，增加细胞因子的产出率。