本发明涉及干细胞领域，公开了脐带间充质干细胞的冻存保护液及冻存方法。本发明所述脐带间充质干细胞的冻存保护液包括10v/v％-20v/v％DMSO、30v/v％-80v/v％脐带间充质干细胞条件培养基、10v/v％-50v/v％胎牛血清。采用本发明所述脐带间充质干细胞的冻存保护液冻存后复苏，细胞回收率明显高于常规冻存液，细胞增殖能力也优于常规细胞冻存液。本发明所述脐带间充质干细胞的冻存方法将脐带间充质干细胞消化离心，加入脐带间充质干细胞条件培养基调整细胞密度，加入等体积的所述冻存保护液后冻存细胞。本发明所述冻存方法冻存的细胞复苏后细胞回收率明显高于常规方法，细胞增殖能力也优于常规的冻存方法。