本发明公开了一种观察血管干细胞附壁的方法，包括以下步骤：1）取待观察的血管干细胞，用荧光染料进行标记后，备用；2）在恒温恒压条件下，对暴露出中动脉的新鲜离体耳灌流5～10min，灌流液自耳中动脉流入，由耳静脉流出；其中，所述暴露出的中动脉为完整的中动脉或损伤的中动脉；3）将步骤1）得到的经荧光染料标记的血管干细胞加入灌流液中，在恒温恒压条件下，避光循环灌流1～4h后，经洗脱、固定后，置于倒置荧光显微镜下观察。本发明易于实施、操作简便、结果明确，证明了用离体耳中动脉观察荧光标记的血管干细胞附壁是可行的。