本发明涉及从脐带中分离和扩增间充质干细胞的方法。其包括如下步骤：对脐带组织进行消毒和清洗，将组织剪成块状，消化处理1-2.5小时，终止消化，对消化得到的细胞进行细胞清洗，获得细胞悬液，将细胞悬液加入T25细胞培养瓶里培养，培养至第3-6天并进行补，继续培养，在第8-11天时进行第一次全换液，此后每1-3天进行一次全换液；当平皿内的贴壁细胞融合率达到50-70%左右时，使用消化酶使贴壁细胞脱离T25细胞培养瓶底部；离心去上清液，加入间充质干细胞培养基重新悬浮细胞，再接种于T25细胞培养瓶进行传代并进行扩增培养，此后每1-3天换液一次，直至融合率达到70-90%后，即得脐带间充质干细胞。本发明方法可有效用于分离和扩增间充质干细胞。