一种人诱导多能干细胞的传代方法及应用，该方法解决了传统克隆块传代方法使细胞易于分化，且转染效率低，难以进行基因修饰的问题。该方法为单细胞传代及其培养方法，包括如下步骤：用消化酶添加ROCK抑制剂将诱导多能干细胞克隆充分消化为单细胞；使用血球计数板或细胞计数仪计数；按照20000-30000细胞/平方厘米的密度将细胞铺至经ECM包被的培养板上；使用添加ROCK抑制剂的培养基对诱导多能干细胞置于37℃，8-15％CO₂条件下培养；传代20代后，诱导多能干细胞的多能性未发生变化，包括多能性基因表达，体内及体外分化潜能等。