本发明公开一种建立和培养人诱导多能干细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：a.制备人成纤维样细胞饲养层：取人成纤维样细胞，接种至培养皿上,10毫克/毫升丝裂霉素C提前处理3个小时，去除丝裂霉素C；b:重编程体细胞，生成人诱导多能干细胞，并将人诱导多能干细胞移植于步骤a中制备的饲养层中培养。采用本发明技术方案，免除了异源细胞和异源蛋白对诱导多能干细胞的影响，同时转录效率高，不影响诱导多能干细胞的分化能力，且培养代数多，维持寿命长，在临床上具有巨大潜力。