本发明属于生物技术领域，是一种提取及培养脂肪干细胞的方法，步骤为：(1)取人脂肪组织，用pH值为7.2-7.4的D-Hank’s平衡盐液反复离心冲洗；(2)将脂肪组织绞碎为1-2mm³小块，加入与所取脂肪组织等体积的消化液进行消化；(3)静置分层：将底层细胞用pH值为7.2-7.4的D-Hank’s平衡盐液反复吹打，清洗干净；清洗下来的液体经筛网过滤，去除未消化组织，离心弃去上清液，获得干细胞；(4)将获得的干细胞按照2-3×10⁴/cm²的密度接种于培养瓶，加入培养液，置于培养箱中进行培养。该方法具有消化速度快，不溶性组织块大幅减少，而且不影响干细胞活性等优点。