本发明公开了一种人脂肪间充质干细胞的制备方法，具体包括脂肪的采集、运输、交接、制备脂肪微块、脂肪微块冻存和复苏、SVF提取、原代和传代培养，工艺简便，成本低，冻存效果好，细胞损伤小，最大程度降低了冻存液在细胞内残留，副作用小，对人体无害，制备出的人脂肪间充质干细胞可以用于临床治疗多种疾病。