本发明提出了一种人表皮干细胞的分离和培养方法，涉及细胞的分离和培养。它通过0.25%Try在4℃条件下冷消化4-8小时进行传代培养，与现有技术相比，本发明的有益效果是本发明中的分离和培养方法，得到的细胞活力高，细胞活力由传统消化方法的77%提高到90%以上；而且活细胞数多，活细胞数由传统消化方法的0.9×10⁵/ml提高到1.8×10⁵/ml，传代培养时贴壁效果良好，细胞贴壁率由62%上升至88%；同时，利用传统的消化方法消化表皮干细胞后，细胞一般只能传2-3代；利用本发明后，细胞一般能传6-8代，传代次数也得到了提高。