本发明涉及生物技术领域，公开了一种复苏脐带间充质干细胞的方法。该方法将传代至P3-P5代的脐带间充质干细胞用完全培养基培养后，再用无血清的DMEM/F12培养基培养，分别在培养24h、48h、72h时收集培养基上清，将各上清离心后再取上清混合，获得条件培养基；将冻存的脐带间充质干细胞解冻，并加入到条件培养基中离心去上清，然后再次加入条件培养基重悬并培养至细胞融合度达到要求。本发明以培养过脐带间充质干细胞的培养基上清为复苏时的培养基，替代现有方法中普遍采用的间充质干细胞完全培养基，依靠其中包含的多种细胞在增殖过程中分泌的活性物质来促进复苏后的脐带间充质干细胞的生长，进而提高其活力。