本发明公开了一种诱导小鼠胚胎干细胞分化获得内耳毛细胞的方法，首先用条件培养液和诱导培养液诱导胚胎干细胞分化毛细胞前体细胞；然后利用诱导培养液与滋养层细胞结合的方法诱导前体细胞分化成熟内耳毛细胞；本发明所述方法能够有效诱导胚胎干细胞分化为内耳毛细胞前体细胞和成熟内耳毛细胞，分化比率高，分化所得细胞表达毛细胞特异基因和蛋白，并具备一定毛细胞电生理功能。