本发明公开了一种人多能干细胞培养基及人多能干细胞的培养方法。该人多能干细胞培养基包括基础培养基和添加剂；基础培养基为DMEM/F12培养基；添加剂包括碳酸氢钠400～600μg/ml、硒酸钠8～20ng/ml、重组人胰岛素生长因子10～30ng/ml、重组人碱性成纤维细胞生长因子80～120ng/ml、重组人乳铁蛋白7～13μg/ml、抗坏血酸50～70μg/ml以及重组人转化生长因子1ng/ml～3ng/ml。本发明的培养基成分明确，品质稳定；不含动物源成分，培养过程中不需要动物源细胞做饲养层，使培养的hES细胞和hiPS细胞在移植后不容易产生人体排斥反应，且生长效率高。