本发明公开了一种用于培养间充质干细胞的方法，所述方法包括在2％至5％氧气的低氧条件下于含有浓度为2.1至3.8mM的钙和浓度为1.0至3.0mM的镁的培养基中培养间充质干细胞。所述培养方法通过提高间充质干细胞的增殖能力和生存力可在甚至很少的传代数内增加间充质干细胞的群。另外，通过本发明培养方法制备的间充质干细胞不仅由于其缺乏免疫原性可有效用作安全的细胞治疗剂，而且由于其优异的细胞因子分泌作用而可作为软骨再生药物。