本发明公开了人胚胎滋养细胞和胎盘间充质干细胞的分离与纯化方法，包括以下步骤：胎盘标本处理，得处理后的胎盘组织；组织消化，得到细胞悬液；不连续Percoll梯度密度分离，得到滋养细胞和胎盘间充质干细胞；滋养细胞的纯化；胎盘间充质干细胞的进一步分离与培养。本发明采用HyQTase和DNAse？I共同消化组织，经密度梯度分离获得大量的细胞纯度和活力都比较理想的滋养细胞和的胎盘间充质干细胞；且去除消化碎片、成纤维细胞和红细胞，并把滋养细胞和胎盘间充质干细胞区分开来，获得的细胞滋养细胞纯度可达90％，胎盘间充质干细胞用差速贴壁法将未贴壁的上层除掉，然后向培养瓶中补加无血清培养基继续培养，纯度也很高。