本发明公开了一种胚胎干细胞培养基及其应用。本发明提供的胚胎干细胞培养基，包括如下组分：含有SOX2蛋白的蛋白甲、含有POUV蛋白的蛋白乙、含有Nanog蛋白的蛋白丙、含有cLIN28蛋白的蛋白丁、细胞因子LIF、细胞因子SCF和细胞因子bFGF。所述SOX2蛋白具体如序列5所示。所述POUV蛋白具体如序列7所示。所述Nanog蛋白具体如序列9所示。所述cLIN28蛋白具体如序列11所示。采用本发明提供的胚胎干细胞培养基进行胚胎干细胞的培养，可以使胚胎干细胞长期、大量扩增，并保持良好的全能性。