本发明提供一种胚源性神经干细胞原代细胞分离及传代培养方法，其包括以下步骤：原代神经干细胞的分离和培养，传代培养及单细胞克隆、传代，克隆诱导分化，以及间接免疫荧光检测。本发明采用无血清培养和单细胞克隆技术从胚龄12周的新鲜人胚皮层中分离和培养出具有自我更新和多分化潜能的一株神经干细胞，在3周后可形成大量神经干细胞，该细胞具有连续克隆能力，可传达培养，表达神经巢蛋白抗原；分化后的细胞表达神经元细胞、胶质细胞和少突胶质细胞的特异性抗原，解决了胚源性神经干细胞较难培养的问题。