本发明涉及一种人角质干细胞体外诱导分化制备人毛囊细胞的方法。其技术方案：将人角质干细胞移入装有成分确定的角质形成细胞-SFM初始培养液培养皿中进行贴壁培养，得到初始诱导的人角质干细胞，再制备成细胞膜片备用；取小鼠胚胎期13.5天的小鼠头部的下颚，去除下颚第一磨牙的上皮组织，取出牙间充质干细胞组织，吹打成单细胞悬液，离心后重聚成第一磨牙间充质干细胞团。将人角质干细胞膜片与牙间充质干细胞团重聚再植入小鼠肾包膜下继续诱导分化，得到具有毛囊细胞的组织块。本发明可成功将人角质干细胞诱导分化成人毛囊细胞，整体技术和方法既合理高效，又简便实用，人工诱导分化的人毛囊细胞可望通过移植到皮肤，长出毛发。