本发明涉及干细胞领域，公开了一种脐带间充质干细胞的培养方法。本发明所述脐带间充质干细胞的培养方法，取脐带去除最外层膜及静脉跟动脉，剪碎后加入完全培养基，于37℃，5％CO₂静止培养，期间补加完全培养基，待组织块有细胞爬出后去掉组织块，清洗后加入完全培养基，待细胞集落成片生长后，传代培养。本发明所述培养方法操作简单、安全有效。实验表明，与现有方法相比，本发明所述脐带间充质干细胞的培养方法原代时间短，增殖后获得细胞更多，细胞活力和增殖能力强，培养至P15代后仍然保持良好的增殖能力，且能很好保持脐带间充质干细胞的形态和良好的干细胞特性，适用于脐带间充质干细胞的大量培养。