本发明涉及一种间充质干细胞的分离及应用，主要涉及经关节镜手术获得大量来自关节各组织的间充质干细胞液，采用分段收集、离心等程序，富集其中细胞成分进行培养与扩增；富集的细胞经过贴壁生长、增殖、分化以及外源微生物污染检测等程序后，参照国际ISCT推荐的间充质干细胞标准对富集的干细胞纯度和均一性的鉴定分析，最后分别储存于主细胞库与工作细胞库用于细胞治疗。本发明充分利用了关节镜手术后的废弃液，分离出干细胞用于患者治疗。