本发明属于生物技术领域，本发明公开了一种制备间充质干细胞的方法，该方法以新生儿的脐带为原料，通过脐带预处理、冻存组织、复苏组织、分离原代间充质干细胞、扩增间充质干细胞的方法，该方法具有工业化简单、易于操作等优点，利用本发明方法可以大量冻存脐带组织，在临床有需要时对组织复苏以制备间充质干细胞，与现行的直接分离出间充质干细胞并进行细胞冻存相比，本方法可以充分保存脐带组织内最原始的间充质干细胞，既可大步降低保存成本，又可避免间充质干细胞在体外经多次传代导致其分化而影响其临床应用。