本发明提出一种人胚中脑神经干细胞的原代细胞的分离传代培养方法，其应用于人胚中脑神经干细胞的体外分离培养及分化过程，所述体外分离培养及分化过程是从人胚中脑中分离培养并鉴定神经干细胞。其包括步骤原代中脑神经干细胞的分离培养、原代细胞的传代培养、细胞诱导分化、免疫细胞化学染色以及细胞计数。本发明采用无血清培养和单细胞克隆技术从从人胚中脑中成功建立一株人胚神经干细胞，并进行培养、传代，贴壁分化观察，该细胞具有连续克隆能力，可传达培养，表达神经巢蛋白抗原，分化后的细胞表达神经元细胞、胶质细胞和少突胶质细胞的特异性抗原。