本发明提供一种宫膜干细胞库的构建方法，包括月经血采集、宫膜干细胞分离除菌、扩增及分析检测、长期保存及定期检测的步骤。本发明提供了简便易行的除菌方法，去除细菌等物质的宫膜干细胞通过扩增培养可以获得大量纯度较高的宫膜干细胞，并长期保存，为未来的临床及科研应用研究提供大量的宫膜干细胞资源。