本发明公开了一种人体造血干细胞分化培养方法，包括如下步骤：（1）从脐带血或骨髓来源的血液样本中分离CD34+造血干细胞及其前体细胞；（2）配制人体造血干细胞及其前体细胞体外分化培养基；（3）将（1）中获得的细胞置于（2）中所配置的培养基培养，采取1/2换液法，每3天用PBS清洗一次细胞并更换一次培养基；（4）每3天对（3）培养的细胞采用FACS流式细胞分析技术分析，通过检测细胞表面分子标记物分析细胞的分化情况。本发明的优点为，可以将脐带和骨髓来源的CD34+、前体细胞分化为T细胞和NK细胞，并且可以不依赖于T细胞体外发育所需要的OP9-DL1滋养层细胞或FTOC培养的辅助，是一种稳定、高效的分化方法。