本发明公开了人胎盘间充质干细胞的分离方法，包括以下步骤：胎盘标本处理，得处理后的胎盘组织，将胎盘组织进行组织消化，得细胞悬液；胎盘间充质干细胞的初步传代培养；胎盘间充质干细胞的进一步分离与培养。本发明采用HyQTase和DNAse？I共同消化，分离到胎盘间充质干细胞，初步培养后，再经微重力及电磁场和声波处理，以及BMP4多次处理，用差速贴壁法除掉上层，向培养瓶中补加无血清培养基和抗氧化剂培养，最终纯度很高；通过对其连续传代过程中的遗传稳定性、细胞表面分子表达情况、细胞形态检测等验证了该细胞的干细胞特性，为胎盘间充质干细胞作为临床应用的种子细胞等提供了材料。