本发明涉及一种间充质干细胞的三维诱导培养方法，包括以下步骤：获取间充质干细胞；将间充质干细胞与可溶性的海藻酸盐混合后，加入除镁离子以外的二价金属离子盐溶液中，至形成凝胶球；用诱导剂对凝胶球内的间充质干细胞进行诱导培养。通过利用海藻酸胶体的三维空间结构，为间充质干细胞提供一个模拟体内生长的微环境，扩大了间充质干细胞的生长空间，以及与培养液及细胞间的物质信号交流，促进间充质干细胞的生长分化，提高转化率，增强细胞活性；同时，相较于现有技术中的共培养方式，本发明也可省去分离两种细胞的过程。