本发明涉及一种肝干细胞的大规模制备的方法及其在细胞移植、干细胞培养、扩增、定向分化和组织器官形成领域的用途。本发明所述的肝干细胞的制备方法，包括以下步骤：从动物或人肝组织中采用机械法、酶法和机械-酶法和密度梯度离心法，联合提取肝干细胞；体外大规模培养，扩增，经肝干细胞鉴定后冻存备用。此方法比常规方法制备肝干细胞效率提高约100-10000倍，可用于组织工程学，肝干细胞制剂或干细胞药物的生产，以达到为人类疾病提供一种新的治疗手段。