本发明公开了一种造血干细胞冻存新方法，第一步，取造血干细胞保护剂、造血干细胞悬液或骨髓液，体积比为1-2:6；第二步，将造血干细胞悬液或骨髓液与造血干细胞保护剂混合均匀，然后排净空气、密封放入-80℃冰箱保存12小时；第三步，取出上述的造血干细胞悬液或骨髓液与造血干细胞保护剂混合液，然后再加入造血干细胞保护剂,造血干细胞保护剂与混合液的体积比为1：3，再次排净空气、密封放入-80℃冰箱保存；本发明冻存方法简便易操作，冻存效果更好。