本发明公开了一种恢复间充质干细细胞全能性的培养方法。本发明提供了一种恢复间充质干细细胞全能性的方法，包括如下步骤：1）将全能性降低的离体间充质干细胞悬滴培养，得到悬滴培养后的细胞；2）将所述悬滴培养后的细胞继续悬浮培养，实现恢复间充质干细细胞全能性。本发明的实验证明，本发明提供了一种恢复间充质干细胞全能性的方法，具体采用3D培养，将经过多次传代培养的间充质干细胞（全能性降低的离体间充质干细胞）经3D培养处理后，其增大的体积逐渐恢复、细胞活性增强、克隆能力和分化能力增强、其旁分泌作用也有所提高，使已经衰老的间充质干细胞重返年轻，恢复了干细胞特性。