本发明涉及干细胞培养领域，尤其涉及Y-27632在间充质干细胞培养中的应用及间充质干细胞的培养方法。本发明提供了Y-27632作为间充质干细胞增殖促进剂的应用。本发明通过实验证实，相同培养条件下，培养基中添加Y-27632能够促进间充质干细胞的增殖，本发明还提供了培养间充质干细胞的培养基和培养方法，实验表明，经培养五代后，与未添加Y-27632的对照组相比，添加Y-27632的实验组中，脐带间充质干细胞的数量提高31.87％；羊膜间充质干细胞的数量提高30％，骨髓间充质干细胞的数量提高27.27％。