本发明涉及干细胞培养领域，尤其涉及AcSDKP在角膜缘干细胞分离培养中的应用及角膜缘干细胞的培养方法。本发明提供的培养基中，以胎牛血清促进角膜缘干细胞的生长，以AcSDKP抑制成纤维细胞的生长。因此，采用本发明提供的培养基能够具有选择性的分离角膜缘干细胞，且分离培养所得的角膜缘干细胞的纯度和数量皆较高，且由于成纤维细胞的生长受到抑制，角膜缘干细胞受到成纤维细胞分泌物的影响较少，干性保持良好。实验表明，采用本发明提供的培养基分离角膜缘干细胞，细胞中抗体CX43的阳性率为0.1％，AE5的阳性率为0.3％，BrdU的阳性率为50.3％，PCNA的阳性率为45.9％。该效果显著优于现有技术。