本发明公开了一种干细胞无血清培养基，由基础培养基和添加物组成，基础培养基为DMEM/F12，添加物包含：血清替代物2～15％(v/v)、维生素C 20～100ug/ml、干细胞生长因子0.5～10ng/ml、人血小板源生长因子5～20ng/ml、L-谷氨酰胺1～5mmol/ml。采用本发明的干细胞无血清培养基进行细胞培养，具有细胞周期短，增殖能力强，细胞均一性好，纯度高，有效的抑制干细胞的分化和内皮细胞的贴壁生长，保证干细胞的纯度和干性，另外该培养基不含胎牛血清等动物源成分，通过该培养基获得的干细胞适合于临床应用。