本发明公开了一种人毛囊干细胞库的构建方法，包括供者毛发的采集、获取和分离人毛囊干细胞、人毛囊干细胞的培养、人毛囊干细胞的检测与冻存、建库等步骤。本发明的方法，可有效的分离、纯化和扩增人毛囊干细胞，解决此类资源得不到充分利用的现状，并建立出长期储存人毛囊干细胞的干细胞库以便向临床及科研应用提供大量的干细胞资源。根据获取的人毛囊干细胞构建干细胞库，该库为健康成人储存毛囊干细胞，为其本人在患病需要采用干细胞治疗时，提供临床适用型人毛囊干细胞，并且在取得许可后，可将所储存的人毛囊干细胞用于干细胞制剂生产。