本发明公开了一种人乳干细胞的获取方法及人乳干细胞库的构建方法，主要步骤包括：成人乳汁的采集；获取和分离人乳干细胞；培养人乳干细胞；检测、冻存人乳干细胞；建库。利用本发明的获取人乳干细胞的方法，可有效的分离、纯化、扩增人乳干细胞，解决此类资源得不到充分利用的现状，并建立长期储存人乳干细胞的干细胞库以便向临床及科研应用提供大量的干细胞资源。根据本发明的方法获取的人乳干细胞构建干细胞库，其来源丰富，细胞获取简便，该库为健康成人储存人乳干细胞，为其本人在患病需要采用干细胞治疗时，提供临床适用型脂肪干细胞，并且可以在取得许可后，将所储存的人乳干细胞用于干细胞制剂的生产。