本发明涉及一种干细胞培养基，其能够取代含有异源蛋白质胎牛血清的常规的干细胞培养基，更特定而言，涉及一种含有基础培养基和敲除血清替代物的干细胞培养基，以及一种使用它培养干细胞的方法。根据本发明，能够获得具有降低的自发分化能力的高纯度的干细胞而不必使用异源蛋白质胎牛血清和昂贵的生长因子(EGF和bFGF)，因而能够显著地提高干细胞治疗的效力。