本发明涉及一种阿奇霉素缓释滴眼液中阿奇霉素的含量测定方法。采用有机溶剂与缓冲液按体积比(40～90)∶(60～20)配制流动相，流动相的pH值为5-10；用该流动相分别溶解阿奇霉素滴眼液样品和对照品，按照高效液相色谱法测定阿奇霉素的含量，将配制的样品溶液、对照品溶液分别进样，记录色谱图。本发明采用特定比例的流动相溶解样品，使得阿奇霉素缓释滴眼液中含有的高分子聚合物聚卡波菲能够完全沉淀而不影响药物的含量测定，并能将主药阿奇霉素和辅料的色谱峰完全分离开来，提高检测的准确性。