本发明涉及一种检测CYP3A5基因多态性的试剂盒及方法，属于荧光定量PCR领域。所述试剂盒包括检测用引物以及检测用荧光探针，所述检测用引物和检测用荧光探针包括：CYP3A5基因CYP3A5*3多态性的特异性上下游引物及Taqman荧光探针、CYP3A5基因CYP2C19*4多态性的特异性上下游引物及Taqman荧光探针、CYP3A5基因CYP2C19*6多态性的特异性上下游引物及Taqman荧光探针、和CYP3A5基因CYP3A5*7多态性的特异性上下游引物及Taqman荧光探针中的至少一组。所述试剂盒检测敏感度及特异性均显著提高，检测时间短，有利于预测药物剂量及疗效。