本发明提供一种从蛹虫草中提取N6-(2-羟乙基)腺苷的方法：蛹虫草子实体为原料超微粉碎，得超微粉；超微粉中加超纯水，100℃加热提取，离心取上清，干燥；加少量超纯水使溶解即可，加95%乙醇至终浓度为80%，醇沉过夜后收集上清液，干燥；用15%甲醇-水溶液溶至200mg/ml，过制备液相色谱，洗脱方式为15%甲醇-水溶液等度洗脱30～80min，收集目的色谱峰，浓缩后干燥，得N6-(2-羟乙基)腺苷。该方法简单可控、重复性好，提取得到的N6-(2-羟乙基)腺苷纯度可达98%，被证明具有抗失眠作用可用于制备抗失眠药物。