本发明公开了一种特异抑制COTL1基因表达的siRNA及其应用。本发明提供的一种抑制COTL1基因表达的组合物，由siRNA254和siRNA395组成；所述siRNA395为由序列表中序列1所示的RNA和序列表中序列2所示的RNA组成的双链RNA；所述siRNA254为由序列表中序列3所示的RNA和序列表中序列4所示的RNA组成的双链RNA。本发明的实验证明，本发明提供了一种能够特异高效抑制COTL1基因表达的组合物，其为两种siRNA混合物。该组合物可以应用非酒精性脂肪性肝病发病机制研究和治疗非酒精性脂肪性肝病的药物上。