本发明涉及血样中微量伊马替尼测定方法及在零期临床试验中的应用。具体地说，本发明一个方面涉及一种测定生物样品中伊马替尼或其药用盐的方法，该方法使用高效液相色谱-串联质谱进行测定，并且包括以下步骤和测试条件：测试样品的处理、试样测定、液相色谱条件、质谱条件等。本发明还涉及本发明方法在伊马替尼或其药用盐的零期临床试验中的应用；以及本发明方法在伊马替尼或其药用盐的药代动力学试验研究中的应用。已经发现，具有本发明特征的检测方法可以有益地用于检测伊马替尼或其药用盐例如甲磺酸盐在其药物零期临床试验中生物样品例如血浆中的浓度测定。