本发明提供了一种MTX皮下缓释注射剂-甲氨蝶呤壳聚糖温敏凝胶（CS/GP/MTX），每升甲氨蝶呤壳聚糖温敏凝胶的水溶液中含有以下成分：壳聚糖16-22g、醋酸0.05-0.1mol、β-甘油磷酸钠70-150g、甲氨蝶呤0.1-0.12mol、增溶剂HP-β-CD0.1-0.12mol、等渗调节剂5-50g和pH调节剂。所述CS/GP/MTX的性质稳定、质量可控，外观性状、t_gel、η、pH值、含量、初步稳定性均符合温敏凝胶要求。37℃条件下，CS/GP/MTX在PBS（pH7.4）中5天内缓释70%药物。与MTX注射液比较，CS/GP/MTX在兔背部皮下注射后，C_max降低82%，AUC_0-t增大2.37倍，t_0.02μM延长12.93倍；CS/GP/MTX可降低不良反应，增加疗效。