本发明基因工程医学技术领域，具体涉及一种PD-1蛋白胞外段的亲和肽L8及其应用。该亲和肽L8的氨基酸序列为：Ser-Leu-Pro-Ser-Thr-Thr-Thr-Met-Arg-Leu-Thr-Ser，即：S-L-P-S-T-T-T-M-R-L-T-S，分子量为1293.7。该亲和肽L8在制备抗肿瘤相关药物中应用，所述肿瘤为结肠癌瘤或黑色素瘤。该亲和肽L8采用Fomc固相多肽合成法合成。本发明所获得的PD-1蛋白胞外段亲和肽L8，作用目标明确，对肿瘤的抑制效果明显，尤其是对结肠癌或黑色素瘤的抑瘤效果显著，且无明显副作用，能够明显提高实验动物的生存期，因而具有较好的医疗应用前景。