本发明公开了一种构建先天性肝内胆管发育不良综合征动物模型的方法，解决现有技术较为复杂、费用高、效率低的问题。本发明包括以下步骤：（1）配制γ-分泌酶抑制剂玉米油溶液和γ-分泌酶抑制剂磷酸盐缓冲液溶液；（2）将成年雌雄大鼠合笼，从雌鼠怀孕开始计时，在雌性孕鼠胚胎14天时，向每个羊膜腔注射溶液甲；同时，向孕鼠尾静脉注射溶液乙；（3）常规饲养孕鼠至其生产，胎鼠即为先天性肝内胆管发育不良综合征动物模型。本发明有利于进行先天性肝内胆管发育不良综合征的研究，尤其是病理生理机制研究以及药物的研发。