本发明公开了一种人原代肝细胞与肝非实质细胞共培养方法，该方法是将新鲜的肝组织经暴露的血管用灌注溶液I和灌注溶液II冲洗干净；直至肝组织失去弹性消化完全；然后置于含有细胞洗液的培养皿中，筛选得到单细胞悬液；低密度接种到胶原包被的培养板或培养皿中培养，首先在生长因子的作用下形成100%融合度的单层共培养；最后置于加入含有2%DMSO的维持培养液培养；肝细胞堆积形成肝非实质细胞环绕、入侵生长的肝岛状结构。本发明利用常规的肝细胞分离技术，实现了长达120天的肝细胞体外长期培养与长达72天保持HBV易感性。并且该系统可发展为新的抗HBV药物筛选与评价平台，对抗病毒药物研究具有重要价值。