本发明涉及一种灰星鲨血管生成抑制因子BSFN-I及其制备方法和应用，该血管生成抑制因子的N末端15个氨基酸残基的排列顺序为DPGTGDYKGADEFAKSEQIDNO:1，亦即Asp-Pro-Gly-Thr-Gly-Asp-Tyr-Lys-Gly-Ala-Asp-Glu-Phe-Ala-Lys，分子量为11.9kDa。制备时将灰星鲨软骨匀浆，盐酸胍抽提，丙酮沉淀分级、以及离子交换层析和凝胶层析，得一单峰，即为抑制因子BSFN-I。灰星鲨血管生成抑制因子BSFN-I可用于制备抑制血管生成、防治肿瘤的药物。